? 對大多數(shù)以碳酸鹽作為pH緩沖系統(tǒng)的培養(yǎng)液而言,為了維持穩(wěn)定的pH,培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間,以保持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。同時細胞培養(yǎng)的器皿需要一定程度的透氣,以便于氣體的交換。
? 由于空氣中的二氧化碳濃度很低,如果細胞不在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)液中的HCO3 -(碳酸氫根)會被耗盡,這樣會影響細胞的正常生長。所以大部分動物細胞的培養(yǎng),還是需要二氧化碳培養(yǎng)箱。
? 3. CO2控制:
CO2濃度探測可通過——紅外傳感器(IR)進行測量。當二氧化碳培養(yǎng)箱的門被打開時, CO2從箱體內(nèi)漏出,此時傳感器就會探測到CO2濃度的降低,并做出及時的反應(yīng),重新注入CO2使其恢復(fù)到原先預(yù)設(shè)的水平。
? 紅外傳感器(IR)它是通過一個光學(xué)傳感器來檢測CO2水平的。IR系統(tǒng)包括一個紅外發(fā)射器和一個傳感器,當箱體內(nèi)的CO2吸收了發(fā)射器發(fā)射的部分紅外線之后,傳感器就可以檢測出紅外線的減少量,而被吸收紅外線的量正好對應(yīng)
于箱體內(nèi)CO2的水平,從而可以得出箱體內(nèi)CO2的濃度。因為IR系統(tǒng)不會因溫度和相對濕度的改變而受到影響,特別適用于需要頻繁開啟培養(yǎng)箱門的細胞培養(yǎng)。二氧化碳培養(yǎng)箱
? 配氣式CO2濃度控制是通過分別調(diào)節(jié)CO2氣體和空氣的流量,調(diào)節(jié)出來的CO2濃度。 需通過公式計算出濃度%,不能直接顯示,不直觀。
CO2 % = V CO2 /( V CO2 + V空氣) ×100%
? 公式舉例:
當二氧化碳流量關(guān)閉時, CO2 % 為0;
當二氧化碳流量調(diào)至40ml/min,空氣流量調(diào)至760ml/min時,
CO2 % = 40/(40+760)×100% = 5% ;
當二氧化碳流量調(diào)至90ml/min,空氣流量調(diào)至360ml/min時,
CO2 % = 90/(90+360)×100% = 20% ;
? CO2 % = V CO2 /( V CO2 + V空氣) ×100%
? CO2 % 二氧化碳含量百分比
? V CO2 二氧化碳流量 ml/min (二氧化碳流量為10~100ml/min可調(diào))
? V空氣 空氣流量 ml/min (空氣流量為160~1600ml/min可調(diào))二氧化碳培養(yǎng)箱
? 污染物的控制:
污染是導(dǎo)致細胞培養(yǎng)失敗的一個主要因素,因而,二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們設(shè)計了多種不同的裝臵去減少和防止污染的發(fā)生,其主要途徑都是盡量減少微生物可以生長的區(qū)域和表面,并結(jié)合自動排除污染裝臵來有效防止污染的產(chǎn)生。
①紫外線滅菌(UVC):紫外線滅菌是紫外線波長在240~280nm范圍內(nèi),尤其在波長為253.7時紫外線的滅菌作用最強。破壞細菌病毒中的DNA(脫氧核糖核酸)或RNA(核糖核酸)的分子結(jié)構(gòu),造成生長性細胞死亡和(或)再生性細胞死亡,達到滅菌消毒的效果。紫外線可以殺滅各種微生物,包括細菌繁殖體、芽胞、分支桿菌、病毒、真菌、立克次體和支原體等。缺點僅能對紫外線所輻射到的區(qū)域滅菌(因紫外線穿透力弱),可能留有輻射死角。
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